25- laboratoriya ishi: Oqsillarning kislotali gidrolizi

25- laboratoriya ishi: Oqsillarning kislotali gidrolizi
Oqsil (protein) gidroliz jarayonida peptidbog'larining uzilishi va oqsil molekulasi avval yuqori molekulali polipeptidlar, so'ngra oddiyroq peptidlarga va nihoyataminokislotalarga parchalanadi.Oqsillarni kislotali gidrolizi xlorid kislota yokioltingugurt kislotalariishtirokida qaynatish yoli bilan amalga oshiriladi.
Laboratoriya gidrolizi buoqsilning birlamchi tuzilishini o'rganish uchun muhim usuldir. Organizmda oqsil gidrolizidoimohazm qilish jarayonida va to'qimalardaproteolitik fermentlar ta'sirida sodir bo’ladi.
Ishning borishi: Qaytar sovutgich bilan jixozlangan kichik kolbaga 2-3 ml 2% albumin eritmasi va15-20 ml 25% sulfat kislota eritmasi quyiladi. Kolbadagi tarkib60-90 daqiqa davomida mo’rili shkaf ostida qaynatiladi. Har yarim soatda (qaynash vaqtidan boshlab) gidrolizatda biuret bilanreaktsiyasi o’tkaziladi: buning uchun 0,5 ml gidrolizatga, universal indikator qog'ozbo'yicha neytral reaktsiya ko'rsatkichigacha 30% ishqor eritmasiva 1-2 tomchi 1% mis sulfat eritmasiqo'shiladi. Salbiybiuret reaktsiyasi oqsilning to'liq aminokislotalarga parchalanishini bildiradi.
Taqqoslash uchun, albuminning 2% li eritmasi bilan biuret reaktsiyasi amalga oshiriladi.
26 - laboratoriya ishi: Oqsillarni gel-filtratsiya usulida tozalash
Kerakli asboblar: diametri 0,6 sm uzunligi 8 sm li shisha naychalar, qayroq tosh, leykoplastir, shisha nayga gel qo‘yish uchun moslama, uzuтninali shprits, disk, elektroforez asbob, sentrifuga, magnitli aralashtirshgich, kapilyatorlar, filtr qog‘oz, pipetkalar, shishi stakanlar, doka, voronka, shishia tayoqcha, muz xammomi, skalpel, shtativ, probirkalar, dim. Suv, muz, bormfenol kukining 0, 001 %li eritmasi, trixlor sirka kislotasining 7 %li eritmasi, aminoshvars 10 vning metananol, sirka kislota, suv.
Ishning bajarilishi: Diametri 0,6 sm, uzunligi 8 sm o‘lchamdagi naycha to‘g‘rilab qirqilib, uchi qayroq toshda silliqlanadi, pastki uchi leykopoastir bilan yaxshilab berkitilib, aniq vertieal xolatda mahkamlanadi. Bu maqsad uchun organik oynadan shtativ tayyorlash mumkin. Buning uchun tepa tomontdan shisha npychalar joylash uchun uzunligi 2 mm diametri 6 mm bo‘lgan 8 ta yacheyka parmalab, monometr va tekshiriladigan modda kuyish uchun o‘rtasidan diamntri 4 mmli qilib teshiladi. Shisha naychaning ppast5k4i og‘zini germetik berkitish uchun oddiy pensilin idishining rezinka qopqog‘idan foydalanish mumkin.
Shisha naychalar vertikal xolatda joylashtirilgandan keyin, pastki gel uchun kuyidagi nisbatlarda boshlangich ertmalar aralashtiriladi.
Pastki qatlamning polimerlanishi 30-60 min davom etadi. Shundan keyin yuza qismidagi suv va kapilyar filtr qog‘oz yordamida batamom olib tashlanadi. Endi 5 mm qalinlikda ustki kons. Gel quyiladi. Uning ustiga ham 8 mm qalinlikda suv quyiladi. Avvval ajaratuvchi keyn kons.lovchi gel yuzasiga suv kuyishdan maqsad birinchidan polimerlanish ketayotgan joyga xaqo kirmaslik, 2 dan monomerlar aralashmasi shisha naychaga qo‘yilgandan xosil bo‘ladigan botik minskni yo‘qotish. Suv quyilganda suv tekis yuzaga aylangan xolda polimerlanadi.