Filtrelerden Süzme Virüslü materyal yalnızca virüslerin geçebileceği büyüklükte porları bulunan filtrelerden süzülerek, virüsler saf olarak elde edilebilirler. Virüsler filtreden geçtiği halde, daha büyük partiküller geçemeyeceği için, filtreden süzülen sıvı saf olarak virüsleri içerir.
Santrifüj Etme Santrifüj işlemiyle bir sıvıdaki partiküller büyüklükleri ile ters orantılı olarak, daha düşük devirlerde çökerler. Virüsler çok küçük partiküller olduğundan çökmeleri için oldukça yüksek devirlerde çevrilmesi gerekir. Bu yüzden virüs içeren sıvı madde, virüslerin çökemeyeceği devirde santrifüj edildiğinde, ortamdaki tüm partiküller dip kısımda çöktüğü için, üst sıvı yalnızca virüs içerecektir. Bu sayede virüsler saflaştırılmış olacaktır.
Lipit ihtiva etmeyen virüslerin, yani zarfsız virüslerin bakterilerden arındırılması işleminde kullanılır. Bu amaçla virüs içeren materyal eter ve kloroform ile muamele edilip bir süre bekletilir. Bu sayede ortamdaki bakteriler ölürken, virüsler canlı kalırlar.
Adsorbsiyon Yöntemi Virüs ihtiva eden materyal içerisine virüse uygun bir adsorptif madde ilave edilir. Bu sayede virüsler bu maddenin yüzeyine tutunurlar. Bu adsoptif maddeler santrifüj edilerek dip kısıma çökeltilirler. Daha sonra ise virüsler bu adsorptif maddenin yüzeyinden özel yöntemlerle ayrıştırılırlar. Tekrar santrifüj edildikten sonra adsorbtif maddeler çöktüğü için, virüs ihtiva eden üst sıvı alınarak, virüsler saflaştırılmış olur.
Hemaglütinasyon Yöntemi Hemaglütinin içeren yani hemaglutinasyon yapan virüslerin saflaştırılmasında kullanılan bir yöntemdir. Virüs içeren süspansiyona, duyarlı olduğu eritrosit süspansiyonundan ilave edilerek bir süre inkübe edilir. Virüsler inkübasyon sırasında eritrositlerin yüzeyine yapışırlar. Daha sonra süspansiyon eritrositlerin çökeceği devirde santrifüj edilerek eritrositler çökeltilir. Bu sayede eritrositlerin yüzeyindeki virüsler, ortamdaki bakterilerden ve diğer mikroorganizmalardan ayrıştırılırlar. Daha sonra çökelti üzerine 10 cm3 sulandırıcı ilave edilir. 370C'de 1 saat bekletildiğinde virüsler eritrositlerin yüzeyinden ayrılarak sıvıda serbest hale geçerler. Bu sıvı tekrar aynı devirde santrifüj edilerek üst sıvı alınır. Bu sayede eritrositler dip kısımda çökerken, virüsler üst sıvıda kalarak saflaştırılmış olurlar.
VİRÜSLERİN ÜRETİLME SİSTEMLERİ Virüsler zorunlu hücre içi parazitleri olup, üremeleri için mutlaka canlı hücrelere ihtiyaçları bulunmaktadır. Metabolik enzimleri bulunmadığı için, enfekte ettikleri hücrelerin tüm fonksiyonlarını kendi lehlerine kulla-nırlar. Yani içinde bulundukları hücreyi bir nevi esir alırlar.
Virüslerin üretilmesinde üç canlı sistem kullanılır. 1 - Deney Hayvanları 2 - Embriyonlu Yumurta 3 - Hücre Kültürü
Kullanım Amacı Genellikle araştırma amacıyla kullanılır. Rutin hizmetler için hem zaman alıcıdır, hem de pratik değildir. Daha çok serolojik deneylerde kullanılacak antijenlerin hazırlanması ve aşı hazırlanması amacıyla kullanılır.
Deney Hayvanı Seçimi Deney hayvanı olarak genellikle fare, tavşan, kobay, keme gibi hayvanlar kullanılır. Her deney hayvanında her virüsün üretilmesi mümkün değildir. Virüs üretimi için, o virüse duyarlı deney hayvanının seçilmesi gerekir. Bunun yanında bakımı kolay olması ve kolay bulunması nedeniyle deneylerin birçoğunda fare tercih edilir. İnsanlardaki hastalıklara benzer bir tablo oluşturulması yönünden en önemli deney hayvanı ise maymundur. Deneye alınacak hayvanlar sağlıklı olmalıdır. Gizli, latent herhangi bir viral enfeksiyonu bulunmamalıdır.
Ekim Tekniği Ekimler mutlaka aseptik ortamlarda ve steril şartlarda yapılmalıdır. Hangi virüs ekilecekse ona uygun bir ekim yeri belirlenmelidir. Virüsün hedef organına ve oluşturduğu patolojiye göre en uygun ekim yeri ve yöntemi belirlenmelidir. Ekimin güvenliği açısından gerekirse deney hayvanına anastezi yapılmalır.
Ekim Yerleri Deri üzeri,deri içi, deri altı kas içi, damar içi, periton içi, göz içi, burun içi, kalp içi, beyin içi ekimler yapılabilir.
Ekim Yapılan Hayvanların Denetimi Ekim yapılan deney hayvanları özel bölümlerde veya kafeslerde gözlem altına alınırlar. Her gün sabah akşam kontrol edilerek hastalık belirtileri, felç veya ölüm olup olmadığı araştırılır.
Dostları ilə paylaş:
|
