++kitap++. Fh11



Yüklə 21,05 Kb.
Pdf görüntüsü
tarix14.05.2018
ölçüsü21,05 Kb.
#44164


34

AURAM‹NE – RHODAM‹NE FLORESAN BOYAMA

Dr. Vildan AVKAN O⁄UZ

DEÜ T›p Fakültesi ‹nfeksiyon Hastal›klar› ve Klinik Mikrobiyoloji AD.

Direkt mikroskopi teknikleri konusunun giriflinde verilen genel bilgiler ve

yayma preparat›n haz›rlanmas› aflamalar› hem karbol fuksin boyama hem

florokrom boyama yöntemlerinde ayn›d›r. Rutinde tan› amaçl› en s›k karbol

fuksinli (Erlich Ziehl Neelsen- EZN , Kinyon) boyama kullan›lmakla birlikte, daha

duyarl› ve haz›rlanan preparat›n daha h›zl› taranmas›n› sa¤layan florokrom

boyalar da kullan›labilir. Bu boyama yöntemlerinde, daha küçük bir büyütme ile

daha genifl bir alan taranabilir ve preparat›n taranmas› için gereken zaman azal›r.

Bu nedenle özellikle zaman problemi olan ve fazla say›da hasta örne¤inin

ifllemlendi¤i laboratuvarlarda, florokrom boyama yöntemleri hem tan› için hem

de antitüberküloz tedavi alan hastalar›n izleminde tercih edilebilir.

Florokrom boyamada ana ilke fenollü fuksin yerine floresan boyalar›n

kullan›lmas›d›r. Floresan boyalar, mikobakterilerin lipitten zengin hücre duvar›na

ba¤lanarak, görünür hale gelmesini sa¤lar. Ancak boyalar›n haz›rlanmas›,

amaçlanan hedef (doku, mikroorganizma, antijen antikor kompleksi vs.) ve

boyama ifllemi s›ras›nda ›s›-süre de¤iflikliklerinin uygulanmas› gibi, baz› kriterlere

göre, farkl› floresan boyama yöntemleri uygulanabilir. Bu yöntemler aras›nda

Auramin-Fenol boyama yöntemi, Glikerson ve Kanner’in floresanl› boyama

yöntemi, Auramine-Rhodamine boyama yöntemi, Truant’›n modifiye Auramine-

Rhodamine boyama yöntemi say›labilir. Kullan›lan auramin’in karsinojen oldu¤u

unutulmamal›, özellikle direkt temas-hava yolu izolasyon önlemleri al›nmal›d›r.

AURAM‹N-RHODAM‹NE BOYAMA ‹fiLEM BASAMAKLARI

A. Örneklerin Haz›rlanmas› : Karbol Fuksin boyama yönteminde anlat›ld›.

B- Kimyasal Maddelerin Haz›rlanmas›



35

2.Asit Alkol Haz›rlanmas›

Etil alkol (% 70’lik) ---------- 99.5 ml

Konsantre HCl------------------  0.5 ml

3.Karfl›t Boya Çözeltisi Haz›rlanmas›

Potasyum permanganat (KMnO4) --------- 0.5 gr

Distile su--------------------------------------- 100 ml

C- Kalite Kontrol

Her boyama için mutlak pozitif ve negatif kontroller haz›rlanmal›d›r.



Pozitif kontrol haz›rlanmas›: Middleebrook 7H9 s›v› besiyeri içinde mikobakteri

(mümkünse standart M tuberculosis H37Rv) süspansiyonu haz›rlan›r.Bu

süspansiyondan lam üzerine bir damla konularak ya ›s›t›c› blokta ya da havada

kurutulup, tespit edilir.



Negatif kontrol haz›rlanmas›: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas

aeruginosa ile s›v› besiyerinde haz›rlanan süspansiyondan bir damla lam üzerine

konularak ya ›s›t›c› blokta ya da havada kurutulup, tespit edilir.

D- ‹fllemin Uygulanmas›

Oda ›s›s›nda saklanan boyalar kullan›lmadan önce mutlaka iyice çalkalanmal›d›r.



Haz›rlanan lamlar alevde fiske edilir. (Resim 1)

Haz›rlanan lamlar›n üzerine AR boyas› dökülür ve 15-20 dakika oda ›s›s›nda



beklenir. Boya lam›n üzerini tamamen kaplamal› ve eksilmemelidir (Resim 2,3).

Distile su ile y›kan›r. Klorsuz su kullan›lmal›d›r, çünkü klor floresan› azalt›r



(Resim 4).

Y›kama sonras› % 0,5 asit alkol dökülerek 2–3 dakika beklenir. Yeterli



dekolarizasyon iflleminde ç›plak gözle boya görülmez(Resim 5–7).

Y›kama ifllemi tekrarlan›r (Resim 8).



Zemin boyas› olarak haz›rlanm›fl KMnO4 ile 2 dakika boyan›r. Süre uzat›l›rsa

floresan azalabilir (Resim 9).

Y›kan›r ve havada kurutulur (Resim 10).



Pozitif bir yaymada mikobakteriler, karanl›k bir zeminde sar›-turuncu parlak,

ince, k›vr›k içi tanecikli floresan veren bakteriler olarak görülür (Resim 11)

Her örne¤in boyanmas› s›ras›nda, mutlaka pozitif ve negatif kontrol



kullan›lmal›d›r.


36

Boyanan preparatlar en k›sa sürede 25x ya da 40x büyütme ile floresan



mikroskobunda incelenmelidir. Basil morfolojisi x1,000 ya da x450 büyütme ile

kontrol edilmelidir.

Gerekirse pozitif de¤erlendirilen preparatlar, EZN ya da Kinyon boya ile



boyanabilir.

E. SONUÇLARIN B‹LD‹R‹M‹:

Negatif: Floresan görülmeyen tüm yaymalar “ Aside dirençli basil görülmedi ‘’

fleklinde raporlan›r.



Pozitif: Karanl›k bir zeminde sar›-turuncu parlak, ince, k›vr›k içi tanecikli floresan

veren bakteriler olarak görülür “Aside dirençli basil görüldü’’ fleklinde rapor

edilir. Boyanma yöntemi belirtilir ve yaymada gözlenen aside dirençli basilin

miktar› hakk›nda bilgi verilir. Basilin miktar› hakk›ndaki de¤erlendirmede karbol

fuksin boyama yönteminde kullan›lan tablo rehber olarak kullan›r.

Resim 1–11: Auramine – Rhodamine Floresan Boyama iflleminin resimlerle izlemi

1

2

3



4


37

5

6



7

8

9



10

11



38

KAYNAKLAR

1.

Weitzman I. Mycobacteriology and Antimycobacterial Susceptibility Testing.



Isenberg HD. Clinical Microbiology Procedures Handbook ASM Press, Washington

DC, 2004; 7.2.1- 7.3.1.

2. Bilgehan H. Klinik Mikrobiyolojik Tan›. ‹kinci bas›m Bar›fl yay›nlar›. ‹zmir 1995

: 83-84.


3. Koneman EW, Allen SD, Janda WM, Schreckenberger PC, Winn WC. Color

Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology. Fifth edition Lippincott,

Philadelphia.1997: 903 – 905.

4. Uzun M. Tüberküloz tan›s›nda Ehrl›ch-Ziehl-Neelsen, Fluorokrom boyama

yöntemleri ile BACTEC ve Löwenstein-jensen Kültür yöntemlerinin sonuçlar›n›n

d e ¤ er l e n d i r i l m e si Do k t o r a te z i . ‹ s t an b u l T › p F a k ü l t e si . 1 99 4 .

5.

Baron JB, Peterson LR,Finegold SM. Bailey Scott’s Diagnostic Microbiology



9th edition. Mosby-Y ear Book, St Louis, Missouri. 1995:605-608.

6. Nolte FS, Metchock B. Mycobacterium. In: Murray PR, Baron EJ,Pfaller MA,

Tenover FC, Yolken RH eds. Manuel of Clinical Microbiology 6th ed. Washington.

ASM Press. 1995: 400-38.



7. h t t p : / / w w w 2 . p ro v l a b . a b . c a / b u g s / m y c o b / a f b _ s t a i n / z n s t a i n . h t m

Yüklə 21,05 Kb.

Dostları ilə paylaş:




Verilənlər bazası müəlliflik hüququ ilə müdafiə olunur ©genderi.org 2024
rəhbərliyinə müraciət

    Ana səhifə