Aqrar elm və İnformasiya məSLƏHƏt məRKƏZİ
Yüklə 7,85 Mb. Pdf görüntüsü
|
213
5,8. Высаженный материал культивировали в темноте при температуре 24 ° С - 28 ° С в течение недели. В дальнейшем пробирки с семенами переносили на 2-3 недели в специально оборудованную люминесцентными лампами комнату, с интенсивностью освещения 2 клк и 16-часовым фотопериодом, где культивировали до получения проростков. Для размножения тетраплоидных форм, семядоли со стерильных 2-4 дневных проростков отделяли в условиях ламинарного бокса стерильным скальпелем, разделяли по одной и высаживали на индукционные среды. В качестве индукционных сред использовали среду MS, модифицированную цитокининами (БАП, кинетин) и ауксинами (НУК), в концентрациях 0,5, 1, 2, 3 мг / л. В качестве контроля использовали без гормональную питательную среду MS . Материал культивировали при температуре 24-26 ° С, 16-часовом фото-периоде, при интенсивности освещения - 5 тыс. люкс. Учеты развития осуществляли визуально, после каждых 30 дней культивирования. Полученные конгломераты микропобегов для дополнительной дифференциации и подращивания пересаживали на среду, содержащей половинное содержание фитогормонов, для
дополнительного побегообразования. В последующих пассажах микропобеги высотой более 5 мм отделяли от конгломерата и высаживали по одному в пробирки, на без гормональную среду MS, для подращивания. Для дополнительного размножения сформированных пробирочных растений арбуза проводили их клональное микроразмножение и депонирование путем черенкования на агаризированной безгормональной питательной среде MS. Сформированные растения-регенеранты с хорошо развитыми листьями высаживали в пробирки на питательную среду MS, модифицированное ауксином ИУК, в концентрации 0,5 мг/л для индукции ризогенеза. Для дальнейшей селекционной работы использовали растения-регенеранты с 3 - 7 листьями и 3 - 5 развитыми корнями. Первичную адаптацию растений проводили в течение 3 недель в условиях повышенной влажности воздуха (не менее 75%), при освещении 5 тыс. люкс, 16-часовой длине дня и температуре 22 ° С. При разработке регенерационной системы для размножения растений в культуре изолированных тканей и клеток invitro определение первичного эксплантата является необходимым этапом. В ходе эксперимента подтверждена высокая морфогенная способность к индукции каллусогенеза и органогенеза семядольных эксплантатов арбуза. Через 2 недели культивирования семядолей на питательных средах на их поверхности начиналась индукция светло-зеленого первичного каллуса (рис. 1). Интенсивность его образования на различных вариантах сред зависела от их фитогормонального баланса (табл. 1). Особенностью семядольных эксплантатов была способность к формированию каллуса даже на безгормональной среде, что связано с высокой морфогенной способностью донорских тканей, которые в момент высадки на питательные среды находились на ювенильной фазе развития. 214
В вариантах культивирования эксплантатов на средах с низкими концентрациями БАП (0,5 мг/л) на семядолях наблюдался не высокий процент каллусогенеза. Введение в питательную среду ауксинов (вар. 3) позволило увеличить каллусогенез до 262,7 мм 3 . На варианте питательной среды МS, модифицированном 1 мг/л БАП при отсутствии эндогенных ауксинов каллусогенез характеризовался не высокими параметрами развития. В варианте 7 было зафиксировано существенное увеличение размеров каллуса на семядолях, до 542,8±61,7, что связано с дополнением среды 1 мг/л ИУК. Кроме того на этом варианте регенерация было зафиксировано у 15 % каллусов. Формирование новообразований было зафиксировано через 3 недели культивирования семядолей и происходило методом органогенеза. На поверхности каллусных тканей формировались темно - зеленые структуры, из которых при последующем культивировании образовывались растения- регенеранты (рис. 2). Таблица 1. Влияние различных концентраций фитогормонов на индукцию каллусогенеза и органогенеза из семядольных эксплантатов тетраплоидных форм арбуза (среднее за 2014 – 2015 г.г.) № вар. Концентрация фитогормонов, мг/л Каллусогенез Регенерация, % Количеств побегов, x , шт. Длина побега, x , мм БАП ИУК % x , мм 3 1 MS б/г (контроль) 44 84,5± 12,6 0 0
2 0,5
- 65
114,2 ±10,1 0 0 0 3 0,5 0,1 57
56,7 ± 9,6 0 0 0 4 0,5 1,0 60
262,7±36,8 0 0 0 5 1,0 - 66
146,3±14,3 0 0 0 6 1,0 0,1 51
98,5±4,3 0 0 0 7 1,0 1,0 88
274,0±24,1 15
2,1±0,4 2,4±0,3
8 2,0
0 88
157,4 ± 32,9
0 0 0 9 2,0
0,1 100
324,4±42,1 25
4,6 3,7±2,1
10 2,0
1,0 100
542,8±61,7 0 0 0 11
3,0 - 100 427,8±52,0 74
7,0 25,3±3,2 12 3,0
1,0 100
480,4±66,0 0 0 0 13
4,0 0 100 366,7±45,5 13
2,1 3,4±0,5
14 4,0
1,0 100
401,1±24,3 0 0 0 НСР
0,05
113,3
0,5 В вариантах питательных сред, на которых культивировании семядольных эксплантатов арбуза осуществлялось в присутствии высоких концентраций БАП (2 - 3 мг/л), на каллусах отмечалось увеличение процента органогенных структур, из которых в последствии были получены растения- регенеранты с хорошими параметрами развития побега. Yüklə 7,85 Mb. Dostları ilə paylaş:
|