$-Amyloid

Table 4. Primer list for detection of 10 periodontitis-related species 
 
Species 
Sequence (5‘to 3‘) 
Amplification 
size (bp) 
References 
Positive 
control 
AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG  
CTG CTG CSY CCC GTA G  
315 
[43] 
Pg 
TGT AGA TGA CTG ATG GTG AAA ACC 
ACG TCA TCC CCA CCT TCC TC 
197 
[41] 
Td 
AAG GCG GTA GAG CCG CCG CTC A AGC 
CGC TGT CGA AAA GCC CA  
311 
[42] 
Tf 
GCG TAT GTA ACC TGC CCG CA  
TCG TTC AGT GTC AGT TAT ACC T  
641 
[39] 
Co 
AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG  
GAT GCC GTC CCT ATA TAC CAT TAG G  
185 
[40] 
Cs 
AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG  
GAT GCC GTC CCT ATA TAC GGG G  
185 
[40] 
Pi 
TTT GTT GGG GAG TAA AGC GGG  
TCA ACA TCT CTG TAT CCT GCG T  
575 
[39] 
Pn 
ATG AAA CAA AGG TTT TCC GGT AAG 
CCC ACG TCT CTG TGG GCT GCG A 
804 
[39] 
Aa 
AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG  
CAC TTA AAG GTC CGC CTA CGT GCC 
593 
[40] 
Cr 
TTT CGG AGC GTA AAC TCC TTT TC  
TTT CTG CAA GCA GAC ACT CTT 
598 
[39] 
Ec 
CTA ATA CCG CAT ACG TCC TAA G 
CTA CTA AGC AAT CAA GTT GCC C
 
688 
[39] 
 
Various bacterial species have been reported to be related to periodontitis, among which 
we  recently  focused  on  10  species,  including 
Porphyromonas  gingivalis
  (Pg), 
Tannerella 
forsythia
  (formerly 
Tannerella  forsythensis
)  (Tf), 
Prevotella  intermedia
  (Pi), 
Prevotella 
nigrescens
  (Pn), 
Campylobacter  rectus
  (Cr), 
Eikenella  corrodens
  (Ec), 
Aggregatibacter
 

---

Kazuhiko Nakano, Atsuo Amano and Takashi Ooshima 
48 
(formerly 
Actinobacillus
) 
actinomycetemcomitans
  (Aa), 
Capnocytophaga  ochracea
  (Co), 
Capnocytophaga  sputigena
  (Cs)  and 
Treponema  denticola
  (Td)  [47-49],  based  on  previous 
reports  showing  that  their  distributions  in  periodontitis  patients  were  significantly  different 
from those in periodontally healthy subjects [50-55]. Table 4 lists the primer sets specific for 
each  species  used  in  our  studies,  all  of  which  were  checked  for  specificity  as  well  as 
sensitivityand was reported to range from 10-100 cells in the original studies [39-43]. Figure 
18  shows  an  example  of  the  results  for  the  detection  of  10  periodontal  bacterial  species  by 
PCR  with  species-specific  sets  of  primers.  There  were  two  species  identified  in  the  saliva 
specimen of subject A, whereas 6 species  were detected in the specimen taken from subject 
B. 
 
 
Figure 18. Detection of periodontal bacterial species in oral specimens by PCR methods. The left 
pictures show the two representative cases (subjects A and B) and the right images are stained 
electrophoresis gels for identification of the species in the specimens taken from each case. ―M‖ and 
―PC‖ indicate molecular marker and positive control, respectively, and arrows indicate the positive 
reactions. 
 
2) Distribution of Periodontal Bacteria in Children
 
 
There  have  been  few  reports  describing  the  results  of  the  distribution  of  periodontal 
bacterial  species  in  children  and  adolescents  when  we  initiated  this  study.  It  was  generally 
known  that  children  with  periodontitis  are  rarely  encountered,  which  might  be  one  of  the 
reasons for the few studies analyzing their distribution. Therefore, we decided to analyze the 
distribution  of  the  10  selected  bacterial  species  in  the  dental  plaqueand  saliva  specimens  in 
children  and  adolescents  who  came  to  our  clinic.  Dental  plaque  specimens  were  collected 
from  the  buccal-mesial  sulcus  of  the  first  molar  or  second  primary  molar  in  the  right  upper 
quadrant of 119 systemically healthy children (56 boys and 63 girls) aged 2 to 13 years old, 
who  showed  negligible  periodontal  inflammation,  and  their  whole  expectorated  saliva 
specimens  were  also  collected  [47,  48].  The  total  numbers  of  dental  plaque  and  saliva 

---

Periodontal Diseases in Children and Adolescents … 
49 
specimens collected from these subjects were 300 and 208, respectively. Those subjects had 
received no antibiotic medication for at least 3 months prior to each specimen collection. PCR 
 
 
Figure 19. Distribution of periodontal bacterial species in dental plaque and saliva specimens taken 
from periodontally healthy children aged 2-15 years old.  

---

Kazuhiko Nakano, Atsuo Amano and Takashi Ooshima 
50 
detection  using  10  species-specific  primer  sets  showed  that  approximately  15%  of  the 
subjects were negative for any of those 10 species. The total numbers of the detected species 
increased  gradually  with  age  until  5  years  old  and  then  reached  a  plateau  after  the  mixed 
dentition  period.  The  detection  rates  for  most  of  the  species  in  saliva  specimens  were 
significantly  higher  than  those  in  dental  plaque  specimens.