2-Laboratoriya mashg’uloti:
Mavzu: Turgor hodisasini kuzatish. Barg pigmentlari va ularning
xususiyatlari. Ungan urug’lar tomonidan kislorod o’zlashtirishini aniqlash
Mashg‘ulotning maqsadi.
Yashil o‘simliklardagi fotosintez jarayonida
qatnashuvchi pigmentlarning spirtdagi yoki benzoldagi eritmasini olish usullari va
ularning ba’zi bir kimyoviy hamda optikaviy xususiyatlari bilan talabalarni
tanishtirish. 104
Kerakli asbob va reaktivlar
. Biror o‘simlikning quruq yoki ho‘l barglari, eti
spirti, benzin, kristall holdagi ishqor, HCI kisiotasi, CaC03, sirka kislotaning mis
tuzi yoki sirka kislotaning rux tuzi kristallari, kvars qumi, chinni havoncha, filtr
qog‘ozi, voronka, shisha tayoqcha, qaychi, spirt lampa, vazelin, spektroskop,
shativ va probirkalar, pipetka, rangli qalam.
Umumiy tushuncha
. Xlorofill a va b turlarini saqlovchi, fotosintezlovchi barcha
eukariot organizmlar bir muncha keng tarqalgan qabul qiluvchi qismlarning
oqsillari struktura jihatidan o‘xshash oqsillar oilasiga kiradi. Bu oqsillarning bir
nechtasi II foto tizimlar bilan bog‘langan bo‘ladi va II yorug‘lik qabul qiluvchi
(yig‘uvchi) oqsil birikmalari deb ataladi. Boshqa oqsillar
esa I foto tizimlarga
bog‘langan bo‘ladi va yorug‘lik qabul qiluvchi (yig‘uvchi) oqsil birikmalari deb
ataladi. Qabul qiluvchi qismlarning bunday birikmalari xlorofillarning a va b qabul
qiluvchi qismlari oqsillari nomi bilan yuritiladi. (Paulsen 1995, Grin va Durnford
1996).
Ishni bajarish tartibi.
Eritmasini tayyorlash uchun o‘simlikning quruq yoki ho‘l
bargi olinadi. Agar quruq barg bo‘lsa, u ezilib kolbadagi spirtga solib qo‘yiladi. Bu
pigmentlar ajralib chiqishini tezlashtiradi. So‘ngra pigmentlarning spirtdagi to‘q
yashil eritmasi filtrlab olinadi. Ho‘l o‘simlik bargidan pigmentlarni ajratib olish
uchun 4-5 g barg qaychida mayda qirqiladi (bunda yirik tomirlari va barg bandi
olib tashlanadi). So‘ngra
chinni havochaga solib, barg yaxshi ezilishi uchun kvars
qumi va hujayra shirasing kislotasini neytrallash uchun ozgina CaC03 qo‘shib
eziladi. Bargni ezish davomida oz-ozdan eti spirti qo‘yib turiladi. So‘ngra bu
ezilgan massa probirkalarga (filtr qog‘ozi orqali) filtrlab olinadi. Chinni
havonchadan eritma oqib ketmasligi uchun havonchaning chetlariga vazelin surkab
qo‘yish kerak. Olingan yashil filtratda xlorofill “a”, xlorofill “b”, karotin, ksantofil
pigmentlari bo‘ladi. 105 Filtrat to‘rtta probirkaga bo‘lib solinadi va
quyidagi ishlar
bajariladi: Pigmentlarni ajratish. a) Kraus usuli. Pigmentlarni ajratishda ularning
spirt va benzinda turlicha erish xossasidan foydalaniladi. Buning uchun bitta
probirkaga pigmentlarning spirtdagi eritmasidan 4 ml olib, uning ustiga (o‘zidan
ko‘proq miqdorda) 6 ml benzin qo‘yiladi. Probirkaning og‘zi probka yoki bosh
barmoq bilan berkitilib, yaxshilab chayqatiladi va tinish uchun bir
necha daqiqa
shtativga qo‘yib kuzatiladi. Bir necha daqiqadan so‘ng probirkaning yuqorigi
benzin qavatida yashil rangli xlorofill “a” va “b” hamda pastki spirtli qavatida
sarg‘ish rangli ksantofil pigmenti ajralib chiqadi. Agar pigmentlarning ajralishi
yaxshi bo‘lmasa, u holda yana 3-4 tomchi suv tomizilib qaytadan aralashtiradi.
Agar suv ko‘proq qo‘shilib ketsa, pastki qavat loyqalanib qoladi. Bu
holni spirt
qo‘shish yo‘li bilan yaxshilash mumkin. b) Filtr qog‘ozi yordamida
(xromatogramma usulida) pigmentlarni ajratish. Rus fitofiziologi M.S.Svet
tomonidan ishlab chiqilgan bu usul pigmentlarni xromatogramma usulida ajratish,
pigmentlar
aralashmasini adsorbentga, ya’ni so‘ruvchi-shimuvchi qog‘ozga
o‘tkazishga asoslangandir, har xil pigmentlarning bir xil erituvchida erish darajasi
har xil bo‘ladi va ularning bir xil adsorbentda shimilishi ham har xildir.
Erituvchidagi pigmentlarning adsorbent yuzasida so‘rilish darajasiga qarab, ular
har xil joyda so‘rilib qoladi. Erituvchida pigmentlarning erish xususiyati qancha
yuqori bo‘lsa, u shu adsorbent tomonidan shuncha sekin so‘riladi. Bunda
pigmentning harakati tez bo‘lib, uning adsorbent yuzasida
joylashishi yuqoriroq
bo‘ladi. Buning uchun uzunligi 20 sm, eni 1 smli filtr qog‘ozi qirqib olinib, uning
bir uchi pigmentlarning spirtli eritmasiga botirilib qo‘yiladi. Suzma filtr qog‘ozi
bo‘ylab yuqoriga qarab ko‘tarila boshlaydi. Yashil pigmentlar kuchliroq so‘riladi.
Shuning uchun filtr qog‘ozida dastlab yashil qatlam- xlorofill “a” va “b”, ularning
yuqorisida 106 sariq pigmentiar - karotin va ksantofill dog‘lari paydo bo‘ladi. Eng
yuqori qatlam esa rangsiz bo‘ladi. Shu rangli qatlamlarning rasmi chizib olinadi
(rangli qalam bilan)