İÇİndekiler yeni teklif projeler
Yüklə 412,02 Kb.
|
8.3.Materyal ve Metot: Materyal: Proje Lalahan Hayvancılık Araştırma Enstitüsü’nde yürütülecektir. Projenin hayvan materyalinin yaşlara göre dağılımı Tablo 1.’ de verilmiştir. Tablo 1.’ de gösterilen koyunlardan doğacak kuzular da projede hayvan materyali olarak kullanılacaktır. Projenin yem materyali olarak Enstitüde rutin uygulanan yemler ve yemleme sistemi kullanılacaktır. Tablo .1 Şubede bulunan hayvan materyalinin yaşlara göre dağılımı( 14. 01. 2008) GENOTİP
♂ ♀ TOP ♂ ♀ TOP ♂ ♀ TOP GENEL TOPLAM
2007 6-12 ay 11 36 47 5 19 24 5 14 19 90 2006 1 6 24 30 4 13 17 3 10 13 60 2005 2 4 29 33 1 8 9 1 5 6 48 2004 3 2 23 25 1 13 14 11 11 50 2003 4 21 21 14 14 8 8 43 2002 5 1 16 17 4 4 3 3 24 2001 6 7 7 3 3 10 2000 7 3 3 2 2 5 1999 8 1 1
AKK : Akkaraman KAG1 : Kıvırcık x Akkaraman G1 SAG1 : Sakız x Akkaraman G1 Metot: Kuzularda büyüme ve yaşama gücü: Araştırma 2006 yılı sıfat sezonunda başlamış olacaktır. Tohumlamalarda elde sıfat yöntemi uygulanacaktır. Doğan kuzulara plastik kulak küpeleri takılarak doğum ağırlıkları ve bireysel bilgileri kaydedilecektir. Kuzular süt emme döneminde 15 gün, süt kesiminden 6 aylık olana kadar 1 aylık, 6 aylıktan bir yaşına kadar iki aylık aralıklarla tartılarak büyümeleri incelenecektir. 15 Kuzular 90 günlük yaşta sütten kesilecektir. Kuzularda ölümler, nedenleri ile birlikte kaydedilecektir. Böylece kuzularda 30., 90. (sütten kesim) ve 1 yaş yaşama gücü değerleri belirlenecektir. Koyunlarda döl verimi: Döl verimi özelliklerini belirlemek için kızgınlık oranı, doğum oranı, bir doğumdaki kuzu sayısı, sütten kesimdeki kuzu sayısı ele alınacaktır. Yapağı verimi ve özellikleri: Koyunlarda yapağı verimi kırkım mevsiminde belirlenecektir. Her koyundan alınacak ortalama 25 gr numune, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Ensitüsünde bulunan Yapağı ve Tiftik Analiz Laboratuvarında analiz edilerek yapağı özellikleri belirlenecektir.
bir doğuma ortalama kuzu sayısı, sütten kesilen kuzu oranı, yaşama gücü bakımından gruplar arası karşılaştırmalarda Khi-Kare test metodu kullanılacaktır. Kuzularda büyümeye etki eden; genotip, ana yaşı, cinsiyet, doğum tipi ve doğum ağırlığı gibi çevresel faktörler; sıfat öncesi ve kırkım sonrası canlı ağırlık, gebelik süresi, kirli yapağı verimi ve özelliklerine etki eden genotip, yaş gibi çevresel faktörler En Küçük Kareler Metoduyla incelenecektir. Çevre Faktörlerinin önemliliği için Varyans Analizi, aralarında farklılık bulunan ikiden fazla grubu karşılaştırmak için Duncan testi uygulanacaktır. İncelenen faktörlerin etkilerinin hesaplanmasında alt gruplardaki fert sayılarının farklı olması nedeniyle En Küçük Kareler Metodu kullanılacaktır (4).
Koyunculuğu gelişmiş ülkelerde koyunculukta yetiştirme yönü genellikle et verimidir. Döl ve süt verimi yüksek olan anaç koyunlarla etçi koçlar birleştirilmekte, elde edilen kuzuların hepsi entansif besiye alınmakta ve kaliteli kuzu eti üretimi yapılmaktadır. Türkiye’de et üretimi açığı bulunmaktadır. Bu açığın kapatılmasında koyunculuk önemli bir potansiyele sahiptir. Koyunculuktan elde edilen et üretiminin artırılmasında ise Türkiye’nin çeşitli bölgeleri için uygun olan ve yerli ırkların kullanılması ile elde edilen ana ve baba hatlarına ihtiyaç vardır. Bu proje ile step bölge şartlarına uygun tiplerin elde edilmesi çalışmaları devam ettirilecektir. Projede; her iki tipin kendi içinde yetiştirilmesi yapılacak yani sürüler kendi içinde yetiştirilecektir. Böylece oluşacak genetik açılım seleksiyona imkan verecek ve beklenen özellikleri gösteren bireylerin seçimi sağlanacaktır. Dolayısıyla elde edilen tiplerde önemli bir seleksiyon yapılmış olacaktır. Ayrıca daha sonra uygulanabilecek projelerle, elde edilen bu tiplerin, etçi ırklarla melezlenerek, kaliteli kuzu eti üretiminde kullanılma imkanları da belirlenebilecektir. Böylece kaliteli kuzu eti üretiminin artırılmasında Akkaraman, Kıvırcık ve Sakız ırklarından yararlanma imkanları ile ilgili bilgiler elde edilecektir. 9. ÖNERİ SAHİPLERİNİN YETERLİLİĞİ: 9.1. Proje lideri : Melik AYTAÇ Zir. Yük. Müh. (Lalahan Hay. Mer. Arş. Ens.) 9.2. 2.Yardımcı Araştırmacı: Ali BİLGEN Zir. Yük. Müh. (Lalahan Hay. Mer. Arş. Ens.) 9.3. 3.Yardımcı Araştırmacı: Halil EROL Vet. Hek. (Lalahan Hay. Mer. Arş. Ens.) 9.4. 4.Yardımcı Araştırmacı: Prof. Dr. Halil AKÇAPINAR (A.Ü.Vet.Fak. Zootekni A.B.D.) 9.5. 5.Yardımcı Araştırmacı: Doç.Dr. Necmettin ÜNAL ( A.Ü.Vet.Fak. Zootekni A.B.D.) 10. ARAŞTIRMA BİRİMİNİN YETERLİLİĞİ: 10.1. Birimde çalışan araştırmacı sayısı. 1 Veteriner Hekim (Şube Şefi), 1 Ziraat Yüksek Mühendisi, 10.2. Birimde çalışan destek personeli sayısı: 6 İşçi 10.3. Birimde varolan donanım: 1 Ad. Sabit Kırkım Makinası, 1 Ad.. Seyyar Kırkım Makinası, 2 Ad. 300 Kg Çekerli Elektronik Kantar, 10.4. Birim dışında yararlanılabilecek donanım: Yem Hazırlama Ünitesi. 10.5. Birimde yürütülmekte olan araştırma – geliştirme etkinlikleri: 16
Araştırma ekipmanı: 1. Yıl 2. Yıl 3. Yıl a. Makine, teçhizat, demirbaş Taşıt bakım ve onarım giderleri (360-083) --- 2,000 2.000 b. Bina küçük onarım giderleri (370) --- 3,000 5.000 c. Makine, teçhizat alımları ve büyük onarımları (620) --- ------ ------ d. Yapı, tesis ve büyük onarım giderleri (710) 20,000 20.000 ------
a. Kırtasiye, baskı ve yayın giderleri (410) ----- 1,000 1,000 b. Akaryakıt ve yağ giderleri (430 –083) ----- 1,000 1.000 c. Elektrik, su ve havagazı Giderleri (440) ----- 1,000 1.000 d. Yiyecek ve yem alımları (450) ----- 15,000 20,000 e. Özel malzeme alımları (460) ----- ------ ----- Ara Toplam: ----- 18.000 23.000 Cari Giderler a. Geçici görev ve yollukları (210, 240) ----- 750 750 b. Ulaştırma ve haberleşme giderleri (320) ----- 750 750 c. Kiralar (350) ------- ------ ------ d. Diğer hizmet alımları (390) ------ 3,000 4,000 Ara Toplam ----- 4,500 5,500 Harcama kalemlerine / yıllara göre bütçe dağılımı (YTL) Kalemler 1. Yıl 2. Yıl 3. Yıl 200 - 750 750 300 - 8.750 10.750 400 - 18.000 23.000 500 - - - 600 - - - 700 20,000 20,000 - 800 - - - 900 - - - TOPLAM 20,000 47.500 34.500 GENEL TOPLAM.........................................................................................102,000 17
Proje faaliyetleri Ayrıntılı Bilgi Zamanlama Sıfat (Koç Katımı) Takibi Elde Sıfat Takibi Ekim 2006 Doğumların Takibi Kuzuların Numaralandırılması Şubat-Mart 2007 Büyüme ve Yaşama Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Şubat 2007-Şubat 2008 Yapağı Verimi Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Haziran-Temmuz 2007 Yapağı Laboratuvar Analizleri Temmuz 2007- Sıfat (Koç Katımı) Takibi Elde Sıfat Takibi Eylül-Ekim 2007 Doğumların Takibi Kuzuların Numaralandırılması Şubat-Mart 2008 Büyüme ve Yaşama Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Şubat 2008-Şubat 2009 Yapağı Verimi Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Haziran-Temmuz 2008 Yapağı Laboratuvar Analizleri Temmuz 2008- Doğumların Takibi Kuzuların Numaralandırılması Şubat-Mart 2009 Büyüme ve Yaşama Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Şubat 2009-Şubat 2010 Yapağı Verimi Takibi Tartımlar ve Kayıtlar Haziran-Temmuz 2009 Yapağı Laboratuvar Analizleri Temmuz 2009- Elde Edilen Verilerin İstatistiki Analizleri Aralık 2009-Haziran 2010 Proje Sonuç Raporunun Yazılması ve Sunulması Haziran 2010-Aralık 2010
1. Akçapınar, H., Özbeyaz, C., Ünal, N., Avcı, M. (2000) Kuzu eti üretimine uygun ana ve baba hatlarının geliştirilmesinde Akkaraman, Sakız ve Kıvırcık koyun ırklarından yararlanma imkanları I. Akkaraman koyunlarda dölverimi, Akkaraman, Sakız x Akkaraman F1 ve Kıvırcık x Akkaraman F1 kuzularda yaşama gücü ve büyüme, TÜBİTAK Türk Veterinerlik ve Hayvancılık Dergisi, 24(1): 71 – 79. 2. Akçapınar, H., Ünal, N., Özbeyaz, C. (2001) Kuzu eti üretimine uygun ana ve baba hatlarının geliştirilmesinde Akkaraman, Sakız ve Kıvırcık koyun ırklarından yararlanma imkanları II. Kuzularda bazı vücut ölçüleri ve toklularda bazı verim özellikleri, Lalahan Hayvancılık Araştırma Enstitüsü Dergisi, 41(1): 25-34. 3. Akçapınar, H., Özbeyaz, C., Ünal, N., Atasoy, F., Aytaç, M. (2002). “Sakız x Akkaraman ve Kıvırcık x Akkaraman Melezlemesi ile Step Bölge Şartları için Yeni Koyun Tiplerinin Geliştirilmesi” Projesi Kesin
4. Düzgüneş, O., Eliçin, A., Akman, N. (1996). Hayvan Islahı.Ankara Üniv. Ziraat Fak.No: 1437. 5. Mundan, D., Özbeyaz, C. (2003). Akkaraman, Kıvırcık x Akkaraman G1 ve Sakız x Akkaraman G1 koyunlarda süt verim özellikleri ile kuzularda büyüme ve yaşama gücü, Doktora Tezi, A.Ü.S.B.E.Ankara. 6. Ünal, N. (2002). Akkaraman ve Sakız x Akkaraman F1 kuzularda yaşama gücü, büyüme ve bazı vücut ölçüleri, TÜBİTAK Türk Veterinerlik ve Hayvancılık Dergisi, 26(1): 109 – 116. 7. Ünal, N., Atasoy, F., Aytaç, M., Akçapınar, H. (2002). Akkaraman, Sakız x Akkaraman F1, Kıvırcık x Akkaraman F1 ve Sakız x Karayaka G1 koyunlarda ilk laktasyon süt verim özellikleri, TÜBİTAK Türk Veterinerlik ve Hayvancılık Dergisi, 26(3): 617 – 622. 8. Yardımcı, M., Özbeyaz, M. (2001). Akkaraman, Sakız x Akkaraman melezi F1 koyunlarının süt verimi ve meme özelliklerinin karşılaştırılması, Lalahan Hayvancılık Araştırma Enstitüsü Dergisi, 41(2): 63-77.
18
TARIM VE KÖYİŞLERİ BAKANLIĞI PROJE TEKLİFİ 1. PROJE ADI : Ankara Keçisi Tekesi Spermasının Farklı Ozmotik Ve Kriyoprotektif Ortamlarda Dondurulması Cryopreservation of Angora Goat Semen in Different Osmotic and Cryoprotective Environments 2. YÜRÜTÜCÜ KURULUŞ: Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü 3. PROJE LİDERİ: Adı Soyadı : Dr. Mustafa Numan Bucak Kurumu : Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsü
5.1. Başlama Tarihi : 01.06.2009 5.2. Bitiş Tarihi : 31.03.2011
Teke spermasının dondurulma işlemleri sırasında soğuk şokuna karşı oldukça duyarlı olduğu bilinmekte, bu duyarlılık ise doğrudan çözüm sonrası spermatolojik parametreleri ve fertiliteyi etkilemektedir. Bu amaçla çalışmada Ankara keçisi tekesi spermasının farklı ozmotik ve kriyoprotektanlı ortamlardaki duyarlılıkları incelenecektir. Bu ortamların oluşturulmasında spermada gelişecek membran hasarları araştırılarak, uygun ozmotik ve kriyoprotektif etki gösteren maddelerin sulandırıcılara ilave edilmesiyle, spermanın dondurulması/çözdürülmesi sonrasında spermatolojik parametre değerlerinin artırılması sağlanmış olunabilecektir. Araştırmada 5 baş ergin Ankara keçisi tekesine ait Ejakülatlar kullanılacaktır. Suni vagen yardımıyla alınan spermalardan uygun özellik gösterenler çalışmada kullanılmak üzere 37 C’taki su banyosunda bekletilecektir. Bekletilen numuneler daha sonra ön görülen sayıda eşit hacimlere bölünerek farklı ozmotik ve kriyoprotektan içeren sulandırıcılarla sulandırılacak ve dondurulacaktır. Çözüm sonrası ozmotik ve kriyoprotektif etkinin spermatozoa üzerindeki duyarlılıklarının ölçülmesinde spermatolojik ve oksidatif stres parametrelerinden faydalanılacaktır.
19 It is known that goat semen is extremely sensitive to cold shock. This sensitivity directly effects post-thaw spermatological parameters and fertility. At this aim, sensitivity of angora goat semen to different environments with osmotic and cryoprotective will be examined. Membrane damages will be searched in semen, formed these environments. Increased values of post-thaw spermatological parameter will be provided, when materials showing osmotic cryoprotective effect are added to extenders. The ejaculates from 5 mature angora goats will be used in the research. Ejaculates showing proper trait in point of spermatological parameters, obtained by aid of artificial vagina, will be waited at 37 C. The waited samples will splitted to eqaual volumes, extended with extenders containing different osmotic and cryoprotectant, and freezed. For measuring sensitivity of osmotic and cryoprotective effect on semen, spermatological and oxidative stress parameters will be used.
Kriyoprotektan, ozmotik ve kriyoprotektif etki, spermanın dondurulması, teke sperması Cryoprotectant, osmotic and cryoptotective effect, semen cryopreservation, goat semen
Araştırmanın amacı, teke spermasının farklı ozmotik ve kriyoprotektif ortamlarda duyarlılıklarının incelenerek spermanın dondurulmasında uygun olabilecek sulandırıcı bileşenlerinin belirlenmesidir. Bilindiği üzere teke spermasının sulandırıcı bileşenlerine ve sulandırma aşamalarına duyarlılığı yüksektir. Bu amaçla spermatozoonların farklı ozmotik ve kriyoprotektif ortamlardaki davranışları incelenecek ve spermanın dondurulmasında uygun sulandırıcının belirlenmesine çalışılacaktır.
Etkili sperma saklama protokolleri suni tohumlama sonrası dölverimi eldesinde etkili olmaktadır. Bu protokoller de direk olarak sperma ortamına katılan sulandırıcı ve bileşenlerinden direk olarak etkilenmektedir. Tekelerde etkili sulandırıcı oluşturulmasında yapılan çalışmalar dondurma sonrası dölveriminde istenilen oranda sonuç vermemektedir. Bu durumdaki ana sebep, spermanın dondurulması-çözdürülmesi sonrası spermatozoada gelişen şiddetli hasarlardır. Bu konularda yeteri kadar çalışma yapılmasına rağmen, konu üzerinde görüş birliğine varılamamıştır. Bilindiği gibi, kriyoprotektanlar spermanın dondurulma ortamına katılarak hücreleri donma işleminin oluşturduğu soğuk şoku hasarlarına karşı koruma sağlamaktadır (Bucak ve Tekin, 2007; Dobrinsky, 2002). Kryoprotektanlar (disakkaritler, gliserol, etilen glikol, dimetil sülfoksit vs.) hücrenin dondurulmasında oluşan soğuk şoku hasarına, intrasellüler kristal oluşumuna, çözüm esnasında dekristalizasyona, gelişen membransel destabilizasyona ve lipit peroksidasyonuna karşı koruyucu amaçlı olarak kullanılır. Genel olarak koruyucu etkilerini ortamdaki donmamış fraksiyonu artırarak ve ortamdaki iyon miktarını azaltarak gösterirler. Hücre, dondurulmadan önce kryoprotektanlarla inkubasyona tabi tutularak, intrasellüler bakımdan dengeye gelmesi sağlanmaktadır. Kryoprotektanların en önemli özellikleri, düşük moleküler ağırlığa sahip olmaları ve toksik etkilerinin ancak belirli oranlarda katıldıklarında oluşmasıdır Fakat kriyoprotektif maddeler kontraseptif özellikleri nedeniyle hücreler üzerinde olumsuz etkiler de oluşturmaktadır (Bucak ve Tekin, 2007; Palasz ve Mapletopt, 1996; Polge ve ark, 1949, Purdy, 2007). Çözüm sonu motilite değerleri tatmin edici oranlarda olsa da bu maddelerin (gliserol vb) kontraseptif özelliklerinden dolayı fertilite oranlarında düşüşlere neden olması, sperma sulandırıcılarına daha düşük oranda ve farklı kryoprotektan madde (dimetil sülfoksit, etilen glikol vs.) katımını gerektirmektedir (Bucak ve ark, 2007; Hammerstedt, 1993; Purdy, 2006). Bu nedenlerden dolayı gliserolün dışında dimetil sülfoksit, etilen glikol gibi daha başka 20 kriyoprotektan maddelerin sulandırıcılara katılması söz konusu olmuştur. Bu maddelerin tavşan (Dalimata ve Graham, 1997), aygır (Alvarenga ve ark, 2000) ve teke (Kundu ve ark, 2001) spermasının dondurulmasında kullanımı ile ilgili yapılan çalışmalarda iyi sonuçlar gösterdikleri tespit edilmiştir. Donma işleminde etkili en önemli faktör hücrede oluşan ozmotik stres ve bunun yaratacağı oksidatif strestir. Donma sırasında hiperozmotik ortam oluşmasına rağmen, çözüm esnasında kristalizasyonun ortadan kalkmasıyla bu ortam azalmaktadır. Ozmotik stres, intra/ekstraselüler ortamdaki ozmotik farktan ileri gelmektedir. Bu ozmotik farklılığın hesaplanması, hücreden hangi oranda suyun uzaklaştırılmasının belirlenmesi için önemlidir. Suyun uzaklaştırılma oranı ise doğrudan ortama katılacak kryoprotektan yoğunluğuyla ilişkilidir (Curry ve Watson, 1994). Kryoprotektanların ilavesi ortamın hiperozmotik olmasına, hücre membranından içeriye girmeleriyle de hücrede dehidrasyonun şekillenmesine neden olmaktadır. Kryoprotektanların uzaklaştırılmasında da hücreler tekrar şişmekte ve isozmotik hacme ulaşmaktadır (Woelders, 1997). Bu tekrarlanan değişimler kritik noktaları geçtiğinde, hiperozmosize bağlı irreversibl membran hasarı oluşur. Ayrıca hücredeki küçük porların varlığı potasyum ve sodyum iyonlarının giriş-çıkışını sağlayarak, hücrenin hipoozmotik stres ve kolloidal ozmotik hemolize duyarlılığını artırır. Bu durumun önüne geçmek için ortama kademeli olarak kryoprotektanların ilavesi ve spermatozoanın eksternal kryoprotektan içeren sıvılarla muamele edilmelerini gerektirmektedir (Gao ve ark, 1993; Kasai, 2002; Pedro ve ark, 1997). Son yıllarda tekelerde yapılan çalışmalarda sperma hücrelerinin hiperozmotik ortamda daha başarılı bir şekilde dondurulduğu gösterilmiştir Sulandırıcıların ozmotik seviyesi ortama katılan disakkaritler (şekerler) ile ayarlanmakta ve aynı zamanda hücreler için uygun yaşama ortamı sağlanmaktadır (Aboagla ve Terada, 2003; Bucak ve ark, 2007; Bucak ve Tekin, 2007). Önerilen proje kapsamında donma ve çözünmesi sırasında gelişen ozmotik, kriyojenik ve oksidatif hasarlara karşı sperma hücrelerini etkinlikle koruyabilecek bir sulandırıcının ortaya konulması amaçlanmıştır.
Çalışmada, Lalahan Hayvancılık Merkez Araştırma Enstitüsünde 5 baş Ankara keçisi tekesine ait ejakülatlar kullanılacaktır. Ejakülatlar suni vajen yardımıyla alınacaktır. Alınan ejakülatlardan spermatolojik parametreler yönüyle uygun özellik gösterenler çalışmada sulandırma ve dondurma işlemlerinde kullanılacaktır.
Sperma numuneleri 37 C’ta Tris kökenli (Tris-sitrik asit-glukoz-yumurta sarısı) sulandırıcıyla sulandırılacaktır. Sulandırılan numunelerin iç ısılarının yaklaşık olarak 5 C’a düşürülmesinden sonra 6 eşit hacime bölünerek sırasıyla ayni hacimde aşağıdaki trehaloz gruplarıyla tekrar sulandırma işlemleri yapılacaktır. Farklı ozmolariteye sahip trehaloz (disakkarit) solüsyonları Tris sulandırıcısında (% 2 yumurta sarısı, 10 mg/ml BSA ve % 8 gliserol) hazırlanacaktır. 1. sperma numunesi + 100 mOsm trehaloz sol 4. sperma numunesi + 600 mOsm trehaloz sol 2. sperma numunesi + 250 mOsm trehaloz sol 5. sperma numunesi + 800 mOsm trehaloz sol 3. sperma numunesi + 400 mOsm trehaloz sol 6. sperma numunesi+ 1000 mOsm trehaloz sol Sulandırma işlemi ml de yaklaşık 400 milyon spermatozoa olacak şekilde yapılacaktır. Sulandırma işleminin ardından sperma nunumeleri 5 C’ta 1,5 saat bekletildikten sonra 0.25 mm3 lük payetlere çekilerek sıvı azot buharında dondurulacak ve sıvı azot içerisinde saklanacaktır. En az 24 saat dondurularak saklanan numuneler 38 C’a sahip su banyosunda çözdürülerek 1. Spermatolojik parametrelerden spermatozoa motilitesi, akrozom bütünlüğü, plazma membran bütünlüğü ve mitokondriyel aktivitenin tespiti yönüyle 21 2. Oksidatif stres parametrelerinden lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz, katalaz ve superoksit dismutaz aktiviteleri yönüyle, değerlendirilecektir. 2. Farklı kriyoprotektan içeren ortamlarda spermatozoon duyarlılığı Sperma numuneleri 37 C’ta Tris kökenli kökenli (Tris-sitrik asit-glukoz-yumurta sarısı) sulandırıcıyla sulandırılacaktır. Sulandırılan numunelerin iç ısılarının yaklaşık olarak 5 C’a düşürülmesinden sonra 6 eşit hacime bölünerek sırasıyla aynı hacimde aşağıdaki farklı kriyoprotektan içeren gruplarla tekrar sulandırma işlemleri yapılacaktır. Farklı oranlarda kriyoprotektanlara sahip solüsyonlar Tris sulandırıcısında (tris sulandırıcısı, 50 mM sükroz, % 2 yumurta sarısı) hazırlanacaktır. 1. sperma numunesi + % 3 gliserol solüsyonu 2. sperma numunesi + 6 gliserol solüsyonu 3. sperma numunesi + % 3 Me2SO (Dimetil sülfoksit) solüsyonu 4. sperma numunesi + 6 Me2SO (Dimetil sülfoksit) solüsyonu 5. sperma numunesi + % 3 Etilen glikol solusyonu 6. sperma numunesi + % 6 Etilen glikol solusyonu Sulandırma işlemi ml de yaklaşık 400 milyon spermatozoa olacak şekilde yapılacaktır. Sulandırma işleminin ardından sperma nunumeleri 5 C’ta 1,5 saat bekletildikten sonra 0.25 mm3 lük payetlere çekilerek sıvı azot buharında dondurulacak ve sıvı azot içerisinde saklanacaktır. En az 24 saat dondurularak saklanan numuneler 38 C’a sahip su banyosunda çözdürülerek 1. Spermatolojik parametrelerden spermatozoa motilitesi, akrozom bütünlüğü, plazma membran bütünlüğü ve mitokondriyel aktivitenin tespiti yönüyle 2. Oksidatif stres parametrelerinden lipit peroksidasyonu, glutatyon peroksidaz, katalaz ve superoksit dismutaz aktiviteleri yönüyle, değerlendirilecektir.
Yüklə 412,02 Kb. Dostları ilə paylaş:
|