46
endotoxin) kristalleri içerirler. Çoğu hücreler yok olarak, sporlar ve zehir kristalleri
(ikili piramit Ģekilli yapılar) salıverir (ġekil XX).
ġekil XX. Bacillus thuringiensis morrisoni ırkının sporları ve bipiramidal kristalleri.
Etki Tarzı
Bu kristaller, gerçekte bir protoksin -herhangi bir etkiye sahip olmadan
etkinleĢtirilen- olan (yaklaĢık 130-140kD) büyük bir protein bloklarıdır. Kristal
protein normal koĢullarda ileri derecede çözünmez olduğundan, insanlar, büyük
hayvanlar ve çoğu böcekler için tamamen güvenlidir. Ancak, kristal protein yüksek
pH‟nın indirgeyici koĢullarında (yaklaĢık pH 9.5 üzerinde), yaygın olarak Lepidoptera
larvalarının orta bağırsağında bulunan koĢullarda, çözülür. Bu nedenle, Bt ileri
derecede özgün bir böcek öldürücü etkendir.
Protoksin, böceğin bağırsağında çözünebilir olduktan sonra, yaklaĢık 60kD‟luk
etkin bir toksin üretmek için bir bağırsak proteazı tarafından parçalara ayrılır. Bu
toksin deltaendotoksin olarak adlandırılır. Delta-endotoksin, hücre zarlarında
delikçikler (porlar) oluĢturarak ve iyon dengesine öncülük ederek orta bağırsak
epitelyum hücrelerine bağlanır. Bunun sonucunda, bağırsak çalıĢması hızla
durdurulur, epitelyum hücreleri yok olur, larva beslenmeyi durdurur ve kan pH‟sı ile
dengelenen bağırsak pH‟sı azalır. Bu düĢük pH bakteri sporlarının çimlenmesine
olanak verir ve ardında bakteri öldürücü bir kan zehirlemesi ile konukçuyu istila
edebilir. Delta-endotoksinin yapısı ile ilgili yeni çalıĢmalar onun üç etki alanının
(Domain) olduğunu göstermiĢtir. Bunlar Domain-I, Domain-II ve Domain-III‟tür.
47
Etki alanı (Domain) I, bir kısmı veya tamamı, iyonların serbestçe geçebileceği
bir delikçik oluĢturarak bağırsak hücre zarına sıkıĢabilen 7 alfa-sarmal yay yığınıdır.
Etki alanı II, bu etki alanının reseptörleri bağırsağa bağladığını gösteren,
immunoglobulinlerin antijen bağlayıcı bölgelerine benzer, birbirine paralel olmayan
3 tane beta yüzden oluĢur.
Etki alanı III, bağırsak proteazı ile daha fazla parçalara ayrılmayı önleyen,
etkin toksinin açık ucunu (C-sınırı) koruduğu düĢünülen, sıkıca paketlenmiĢ bir beta
sandviçtir. Ġlginç olan, difteri toksininin (diğer bir bakterinin) temelde Bt toksinine
benzer bir yapısı vardır.
Bacillus thuringiensis’in Tarihi, Ürünleri ve Konukçu Böcek Dağılımı
Bacillus thuringiensis ilk olarak 1911 yılında Almanya, Thuringia Vilayetinde,
un güvelerinin bir hastalık etmeni (patojeni) olarak bulunmuĢtur. Böcek öldürücü
ticari bir kimyasal (insektisit) olarak ilk olarak 1938‟de Fransa‟da ve ardından
1950‟lerde ABD‟de kullanılmıĢtır. En eski ticari üretim Sporeine adı altında 1938
yılında Fransa‟da baĢlamıĢtır (Lambert and Peferoen, 1992). B. thuringiensis‟e
ilginin yeniden baĢlaması, 1942 yılında bir kültür elde eden ve izleyen araĢtırmaları
ile B. thuringiensis‟in potansiyeline dikkat çeken Steinhaus (1951)‟a atfetilmiĢtir.
Angus, 1956 yılında, spor oluĢumundan sonra meydana gelen kristal protein
yapıların B. thuringiensis‟ın insektisit etkisinden sorumlu olduğunu göstermiĢtir.
Ancak, bu baĢlangıç ürünleri, farklı böcek çeĢitlerine karĢı özel etkili çeĢitli yüksek
patojenik ırkların bulunduğu 1960‟larda, daha etkili yenileri ile değiĢtirilmiĢtir.
Uzun yıllar, Bt, yüksek bir potent ırk B. thuringiensis kurstaki‟nin kullanılması
ile sadece lepidopteraların kontrolü için sağlanmıĢtır. Bu ırk, hala çoğu Bt
formulasyonlarının temelini oluĢturmaktadır. Çok sayıdaki diğer Bt ırklarının ayrıca
taranması, bazılarının Coleoptera (Kınkantlı) veya Diptera (küçük sinekler,
sivrisinekler) larvalarına karĢı da etkin olduğunu ortaya koymuĢtur. Bu ırkların çoğu
benzer temel toksin yapısına sahiptir, fakat muhtemelen böcek bağırsağında toksin
reseptörlere farklı bağlanma eğilimi derecelerinden dolayı, konukçu böcek
dağılımları farklıdır. Örneğin, B. thuringiensis var aizawai tarafından üretilen
toksinler, Bt kurstaki‟nin toksinlerinden biraz farklı olmakta ve diğer böceklere hiç
etkisi olmadan, Lepidoptera‟lara özgün olmaktadır. Lepidoptera‟ları kontrol için çok
sayıdaki ticari ırklar Biobit®, Dipel®, Javelin® vb. gibi çeĢitli ticari adlar altında
pazarlanmaktadır.
48
Tezat olarak, B.t. var israilensis ırklarının ürettiği toksinler bazı tropikal
hastalıkların taĢıyıcısı simuliid karasineklere karĢı ve ayrıca mantar tatarcık
larvalarına karĢı ve çeĢitli sivrisineklere, (özellikle Aedes türlerine karĢı, ancak,
Culex spp. ve Anoheles spp.‟nın kontrolü daha yüksek toksin dozlar
gerektirmektedir) karĢı yüksek etkilidir. Bu ürünlerin ticari adları Skeetal®,
Vectobac® ve Mosquito Attack® içermektedir. B.t. var san diego VEYA B.t. var
tenebrionis ırkları bazı Coleoptera, özellikle de Kolorado patates kınkanatlısının
kontrolü için pazarlanmaktadır.
Bt Toksinleri ve Sınıflandırılmaları
Bacillus thuringiensis ırkları iki çeĢit toksin üretirler. Temel çeĢitler farklı Cry
(kristal) genler tarafından ĢifrelenmiĢ cry (kristal) toksinlerdir. Bt çeĢitlerinin farklı
sınıflandırılmaları bundandır. Ġkinci çeĢitler, böcek kontrolü etkinliğini arttırmada Cry
toksinleri çoğaltabilen Cyt (cytolytic) toksinlerdir. Cry toksinleri Ģifreleyen yaklaĢık
50 genin dizini çıkarılmıĢ ve dizin benzerlikleri temelinde 15‟den çok grupta
toksinleri belirleme yeteneğindedir. AĢağıdaki Tablo, 1955‟te bu tür bir sınıflamanın
durumunu göstermektedir, ancak, alternatif bir sınıflama Ģimdiden önerilmiĢtir.
Tablo XX. Bacillus thuringiensis‟in kristal toksinlerini Ģifreleyen genleri, kristal
yapıları ile bunların protein büyüklüğü ve etkili olduğu böcek grupları.
Gen
Kristal
Ģekli
Protein boyutu Böcek etkinliği
cry I [çeĢitli altgruplar:
A(a), A(b), A(c), B, C, D,
E, F, G]
ikilipiramit
130-138 kDa
lepidoptera larvaları
cry II [altgruplar A, B, C]
kübik
69-71 kDa
lepidoptera ve diptera
cry III [altgruplar A, B, C]
düz/düzensiz 73-74 kDa
coleoptera
cry IV [altgruplar A, B, C, D] ikilipiramit
73-134 kDa
diptera
cry V-IX
çeĢitli
35-129 kDa
çeĢitli
Dostları ilə paylaş: |