Microsoft Word Dissertation-Ute-Daig-05. 09. 05. doc

 
NO. The data suggest that NO limits in vivo TGF-ß overexpression in a 
pressure-independent manner and that NO donors may be of benefit in the 
treatment of human fibrotic renal disease. 
 
Key words:
 L-arginine, nitric oxide, TGF-ß, fibrosis 

---

 
I
1 
EINLEITUNG 1 
1.1
 
Epidemiologie der chronischen Niereninsuffizienz 
2
 
1.2
 
Molekulare Mechanismen bei der chronischen Glomerulonephritis 
3
 
1.2.1
 
Nierenfibrose als überschießende Wundheilung 
3
 
1.2.2
 
Therapieansätze bei fibrotischen Nierenerkrankungen 
4
 
1.2.3
 
Transforming growth factor ß und seine Rolle in der Nierenfibrose 
5
 
1.2.4
 
Das L-Arginin/NO-System 
6
 
1.3
 
Modell der– Anti-Thy-1-Glomerulonephritis der Ratte 
10
 
1.4
 
Fragestellung 11
 
2 
MATERIAL UND METHODEN 
12 
2.1
 
Materialien 12
 
2.2
 
Tierversuch 12
 
2.2.1
 
Tiere und Tierhaltung 
12
 
2.2.2
 
Die Anti-Thy-1-Glomerulonephritis – Herstellung des Antikörpers 
OX-7 12
 
2.2.3
 
Aufreinigung des Kulturüberstandes 
13
 
2.2.4
 
Induktion der Glomerulonephritis 
14
 
2.3
 
Futter 
14
 
2.3.1
 
Wirkstoffe 15
 
2.3.2
 
Wirkstoffzubereitung 16
 
2.4
 
Studienprotokolle 17
 
2.4.1
 
Protokoll 1 – Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und 
L-Arginin + L-NAME sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-
Glomerulonephritis 17
 
2.4.2
 
Protokoll 2 – Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und 
L-Arginin + L-NAME zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-
Glomerulonephritis 18
 
2.5
 
Versuchsparameter 19
 
2.5.1
 
Messung des systolischen Blutdrucks 
19
 

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II
2.5.2
 
Urinsammlung 19
 
2.5.3
 
Entnahme der Nieren 
20
 
2.5.4
 
Aufarbeitung der Nieren, Isolation der Glomeruli für die Zellkultur 
20
 
2.5.5
 
Zellkultur 21
 
2.6
 
Messung der Krankheitsparameter 
22
 
2.6.1
 
Histologie 22
 
2.6.2
 
ELISA – Enzym Linked Immuno Sorbent Assay 
25
 
2.6.3
 
Proteinurie 30
 
2.6.4
 
Glomeruläre messenger-RNA-Expression von TGF-ß1, Fibronektin 
und PAI-1 
31
 
2.6.5
 
Konzentrationsmessung der RNA mittels Spektrometer 
32
 
2.6.6
 
RT-PCR 33
 
2.7
 
Nitrat/Nitrit-Messung (Griess-Assay) 
37
 
2.8
 
Effekte des NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion in vitro 
38
 
2.9
 
Statistische Auswertung 
39
 
3 
ERGEBNISSE 40 
3.1
 
Protokoll 1  Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-
Arginin + L-NAME sieben Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-
Glomerulonephritis 40
 
3.1.1
 
Gewichtsverhalten 40
 
3.1.2
 
Aufgenommene Dosen von L-Arginin, Molsidomin und L-NAME 
40
 
3.1.3
 
Systolischer Blutdruck 
43
 
3.1.4
 
Glomerulärer Matrixgehalt 
43
 
3.1.5
 
Glomeruläre TGF-ß-Produktion 
44
 
3.1.6
 
Glomeruläre Fibronektin-Produktion 
46
 
3.1.7
 
Glomeruläre PAI-1-Produktion 
47
 
3.1.8
 
Proteinurie 48
 
3.1.9
 
mRNA-Expression von TGF-ß1, Fibronektin und PAI-1 
48
 
3.1.10
 
NO2⎯/NO3⎯
 
 im Plasma 
52
 
3.1.11
 
NO2⎯/NO3⎯
 
 im Urin 
53
 
3.1.12
 
Effekte von NO auf die glomeruläre TGF-ß-Produktion in vitro 
54
 

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III
3.1.13
 
Immunhistochemische Färbung von TGF-ß1-Protein sieben Tage 
nach Induktion der Anti-Thy-1-Glomerulonephritis 
57
 
3.2
 
Protokoll 2  Effekte der Behandlung mit L-Arginin, Molsidomin und L-
Arginin + L-NAME zwölf Tage nach Induktion der Anti-Thy-1-
Glomerulonephritis 59
 
3.2.1
 
Gewichtsverhalten 59
 
3.2.2
 
Aufgenommene Dosen von L-Arginin, Molsidomin und L-NAME 
59
 
3.2.3
 
Glomerulärer Matrixgehalt 
62
 
3.2.4
 
Glomeruläre TGF-ß-Produktion 
63
 
3.2.5
 
Glomeruläre Fibronektin- Produktion 
64
 
3.2.6
 
Glomeruläre PAI-1-Produktion 
65
 
3.2.7
 
Proteinurie 66
 
3.3
 
Zusammenfassung der Ergebnisse 
69
 
4 
DISKUSSION 71 
4.1
 
Methodenkritik 71
 
4.1.1
 
Tiermodelle 71
 
4.1.2
 
TGF-ß-Expression als zentraler Parameter für die Fibroseaktivität 
73
 
4.1.3
 
Weitere Parameter zur Messung der Fibroseaktivität 
73
 
4.2
 
Wirkung der L-Arginin-Gabe, der NO-Donation und der Blockade der 
NO-Synthese auf den Blutdruck 
74
 
4.3
 
Wirkung der pharmakologischen Intervention in den L-Arginin/NO-
Stoffwechsel auf die Expression der Fibrosemarker TGF-ß, Fibronektin 
und PAI-1 sowie auf die Matrixexpansion 
75
 
4.3.1
 
Effekte der diätetischen L-Arginin-Zufuhr 
75
 
4.3.2
 
Effekte der diätetischen L-Arginin-Zufuhr unter gleichzeitiger 
Hemmung der NO-Synthase mit L-NAME 
76
 
4.3.3
 
Effekte der NO-Donation mit Molsidomin 
76
 

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