Azərbaycan Respublikası Kənd Təsərrüfatı Nazirliyi Aqrar Elm Mərkəzi

 
 
инбредных  линий  кукурузы  является  гибридный  материал,  который  включает  простые, 
сортолинейные,  трехлинейные  и  двойные  гибриды,  потомства  возвратных  скрещиваний  и 
синтетические  сорта,  или  же  синтетические  популяции,  полученные  от  шести  или  более 
инбредных  линий.  В  современной  селекции,  наряду  с  получением  инбредных  линий  и 
созданием  высокопродуктивных  межлинейных  гетерозисных  гибридов,  существует 
проблема содержания и сохранения линий в генетически однородном состоянии.  Наличие 
только таких чистых линий и их использование являются гарантом получения  генетически 
однородных  гибридов.  Для  осуществления  контроля  чистоты  линий,  а  также  для 
установления  оригинальности  их  с  целью  защиты  прав  селекционера  и  определении 
подлинности  при  обмене  линиями  между  селекционерами,  необходимы  точные 
объективные  и  достаточно  быстрые  методы  их  идентификации.  Главный  путь  в  этом 
направлении  это  использование  генетических  маркеров.  Для  этого  обычно  используют 
белковые  маркеры  -  различение  генотипов  по  белковому  фенотипу.  Белки  являются 
первичными  продуктами  генетических  систем  организма  и  дают  более  точную 
информацию  о  генотипе,  чем  морфологические  признаки  и  являются  весьма  надежными, 
эффективными  генетическими  маркерами.  Поэтому  для  идентификации  линий  кукурузы, 
как  и  других  культур  очень  удобным  оказался  электрофорез  множественных  генетически 
полиморфных белков зерновки-проламинов или зеина. 
Впервые  в  Азербайджане  нами  проводился  электрофоретический  анализ  зеина    с 
вовлечением 50 местных и интродуцированных линий отобранных из генофонда кукурузы, 
а также  9 местных и еще 9 созданных нами раннеспелых гибридов в течении трех летних 
исследований. Анализы проводились в лаборатории Института Генетических ресурсов. 
С целью экстракция зеина из зерновки кукурузы сначала мы измельчили в ступе 
зерновку  кукурузы  а  затем  измельченную  зерновку  промололи  в  мини  мельнице  до 
консистенции  муки.  К  полученной  муке  мы  добавили  1  мл  70%-го  раствора  этилового 
спирта  и  оставили  на  сутки  при  комнатной  температуре.  Через  сутки  мы  смешали 
полученный супертанат, затем поместили в центрифугу на пять минут при  обороте 2500 
раз. После центрифугирования  из полученного супертаната мы отделили 1 мл в чистую 
пробирку  и  поместили  в  термостат  при  температуре  30-40  °С  и  сушили  до  половины 
консистенции.  После  сушки  к  оставшемуся  супертонату  добавили  раствор  «Е». 
Полученный экстракт положили в экстрактор с NaOH и держали в нем на сутки.   
 
Приготовление раствора «Е» для небольшой дозы 
1. Мочевина                                       - 120 гр                        40 гр 
2. Уксусная кислота                           - 15 мл                        5 мл 
3. Меркаптоэтанол                            - 12.5 мл                     4,1 мл       
  4. Краситель прионин «J»                  - 10 мг                       в малой дозе 
  5. Раствор доводится 
     дистиллированной водой до          - 250 мл                        50 мл. 
 
Приготовление акриламидного геля (основной раствор) 
1. 
Метиленбиакриламид                          - 205,7 мг 
2. 
Акриламид                                            - 4.95 гр 
3. 
Уксусная кислота                                 - 1.4 мл 
4. 
Мочевина CO (NH2)2                           - 31.68 гр 
5. 
Раствор доводится      
          дистиллированной водой до                - 70 мл 
 
 
 
 
 

---

 
 
Вспомогательный раствор для выделения зеина 
 
a) К 110 мг раствора глицин ацетата добавляем 11мл дистил. воды; 
b) К 110 мг раствора аскорбиновой кислоты добавляем 11мл дистил. воды; 
c) К 33 мг раствора сульфата железа (Fe SO4 x 7H2O) добавляем 55 мл дистил. воды; 
d) К 99.55 мг. Персульфата калия добавляем 5.5 мг дистил. воды и смешивается   
 
К приготовленному 7о мл раствора добавляем нижеуказанный вспомогательный 
раствор 
 
1. ТЕМЕД                                              - 0.14 мл  
2. Раствор “a”                                       - 6.6 мл 
3. Раствор “b”                                       - 2.75 мл 
4. раствор “c”                                       - 1 мл 
5. раствор “d”                                       - 1.1 мл 
 
1. Электрофорез проводился в течении 4 часов при 450 V в двух аппаратах 
2. Приготовление буферного раствора и краситель геля готовился по той же методике, что 
и для глиадина. 
Анализ полученных результатов. 
Внизу показана одна из 4-х полученных фотографий зеина  (Рис.1) 
 
 
Рис.1 
После зеин - экстракции и электрофоретического анализа полученные пункты 
(электрофоретические спектры) мы сперва анализировали методом «1» «0». Метод 
основывается на обозначение номером «1» генов расположенных в совпадающих локусах, 
а  гены расположенные в разных локусах бинарной цифрой «0». 
Для  идентификации  генетической  близости  выбранных  68  сортов,  гибридов  и 
линий  мы  использовали  кластерный  анализ  и  составили  дендрограмму.    Для  этого  мы 
использовали SPSS компьютерную программу.  
В результате использованные 68 вариантов классифицировались на 14 кластеров 
(рис.2). 
 
Рис.2 

---

 
 
 
 
В результате анализа дендрограмы выяснилось, что генотипы кластера А наиболее 
богаты  расположенными  на  нем  вариантами  (25  вариантов),  и  отличаются друг  от  друга 
по  генетическому  родству.  Среди  этих  25  вариантов  расположены  8  гибридов  F1, 
полученных  нами  по    ходу  выполнения  диссертационной  работы,  один  местный  сорт 
«Шекерли»,  остальные  являются  сортолиниями.  В  кластере  В  расположились  16,  в 
кластере С- 6, кластере D - 5, а остальные варианты расположились в субкластерах E-, F-, 
G-,  H-,  J-,  K-,  L-,  M-,  N-  и  O-..  Тем  не  менее,  смесь  образцов  кукурузы,  т.е.  образцы, 
сгруппированные в кластерах А- номера 67, 68, 64, 65, 2, 20, 52, 55, в кластере В- 10, 25, 9 
и 30 а также номера 38, 39, 42, 43 из  кластера С являются генетически близкими друг к 
другу.  Изучая  это  сходство,  выяснилось,  что  все  эти  варианты  относятся  к  одной 
ботанической  группе  Zea  Mays  L.  indentata  (зубовидная)  flavorubra.  большинство  из  них 
также раннеспелые сорта и линии. 
В  общем  варианты  дендрограммы  по  процентному  соотношению  расположены 
следующим  образом  :  36.7%-«A»-,  23,5%    «B»-,  8.8%  «C»-,  7.3%  «D»-,  2,9%  «E»-,  1,4% 
«F»-, 2,9%  «G»-, 2.9% «H»-, 2,9%  «J»,  1,4% «K», 2,9 % «L», 1,4% «M», 1.4%  «N” и 1,4 %  
в кластере  «O»-. Только генотипы 19 в кластере F, 48  в кластере K, 33 в кластере «M», 16 
в кластере «N» и номер 29 в кластере «О» по проценту генетического сходства отличались  
и распологались в отдельных единичных кластерах.   
При  анализе  результатов  дендрограммы  отражающей    электрофоретические 
данные  было  выявлено  большое  генетическое  разнообразие  и  богатый  полиморфизм 
среди  исследуемых  нами  68  сортов,  гибридов  и  линий  кукурузы,  что  необходимо  для 
дальнейших  работ  по  гибридизации.  В  последующих    статьях  более  детально  будут 
описаны  наиболее  важные  спектры  генетического  сходства  между  исследуемыми 
вариантами кукурузы. 
 
ЛИТЕРАТУРА 
 
1.
 
«Методика электрофоретического анализа по зеину  кукурузы» (ВИР 1976 г.) 
 
AZƏRBAYCAN GENOFONDUNDAN  SEÇİLMİŞ QARĞIDALI  SORTLARI XƏTLƏRİ 
VƏ HİBRİDLƏRİNİN  MÜƏYYƏN EDİLMƏSİ VƏ QEYDƏ ALINMASI ÜÇÜN ZEİN 
PROTEİNİNİN ELEKTROFORETİK TƏHLİLİ 
 
Elmi işçi, aspirant MƏMMƏDOVA H.R. 
Azərbaycan Elmi Tədqiqat Əkinçilik İnstitut 

---