Sevda dulger tez

 

52 

- Enjektörler   

 

- HAMILTON 50 µl 

 

 

 

 

 

- HAMILTON 100 µl 

- Mikro Filtre   

 

AGILENT 0,45µm Por Çaplı 

- Ultrasonik Banyo    

BANDELIN SONOREKS TK100H 

- Vakum Pompası  

 

NEUBERGER D - 79112 

- Manyetik Karıştırıcı  

MIRAK THERMOLYNE SP72720 - 26 

   ve Isıtıcı  

 

- pH Metre  

 

 

METLER TOLEDO SEVEN MULTI 

 

2.2. ÖN HAZIRLIK ĐŞLEMLERĐ 

2.2.1. GC-MS ve GC Analizlerinde Kullanılan Çözeltilerin Hazırlanması 

-

 

Stok Tetrakosan (Đç Standart) Çözeltisi: 5 mg tetrakosan tartılarak 250 mL 

metanol  :  kloroform  (50:50)  karışımında  çözüldü.  Tetrakosan  metanolde, 

MDMA da kloroformda  iyi çözündüğü için bu bileşimin daha uygun olduğu 

tespit  edilmiştir.  Kullanım  dışında  çözelti  0

0

C’de  saklanmalıdır.  Ancak 

kullanım sırasında oda sıcaklığında olmalıdır. 

-

 

Stok  MDMA  Çözeltisi  (GC  ve  GC-MS  için):  4  mg  MDMA  tartılarak  50 

mL metanol: kloroform (50:50) karışımında çözüldü. 

-

 

MDMA Kalibrasyon standart çözeltileri (GC için): 6, 8, 10, 12, 14, 18, 20 

µg/mL aralığında hazırlanmıştır.  

-

 

Stok  Kafein  Çözeltisi:  2  mg  kafein  tartılarak  100  mL  metanol:  kloroform 

(50:50) karışımında çözüldü. 

-

 

Kafein  Kalibrasyon  standart  çözeltileri  (GC  için):  1,  6,  8,  10,  14,  16 

µg/mL aralığında hazırlanmıştır.  

---

 

53 

-

 

Tabletlerin  Analiz  Đçin  Hazırlanması:  Tabletlerin  her  biri  ayrı  ayrı  toz 

haline  getirilerek  homojen  bir  karışım  sağlandı.  0,3-1,2  µg/mL  arasında 

değişen  derişimlerde  numuneler  hazırlandı.  Numuneler  15dk  ultrasonik 

banyoda tutulmuştur. 

 

2.2.2. HPLC Analizlerinde Kullanılan Çözeltilerin Hazırlanması 

       -   Tampon Çözeltilerin Hazırlanması:  0,0624 M Potasyum Dihidrojen    

Fosfat  (KH

2

PO

4

)    çözeltisi    için    0,5971    g    KH

2

PO

4

  tartılarak    1000    mL  

suda çözülmüştür.  

       -    pH Ayarlamak Đçin:  

        

0,1 M’lık Ortofosforik asit (H

3

PO

4

) çözeltisi için, 0,9799 g H

3

PO

4

 tartılarak    

           100 mL suda çözülmüştür. 1 M’lık Sodyum Hidroksit (NaOH) çözeltisi için,         

           4 g NaOH tartılarak 100 mL suda çözülmüştür. 

-

 

Stok  MDMA  Çözeltisi:  2  mg  MDMA  tartılarak  100  mL  metanolde 

çözülmüştür. 

-

 

MDMA  kalibrasyon  standart  çözeltileri:  0,5;  1;  2,5;  5;  10;  15;  20  µg/mL 

aralığında hazırlanmıştır 

  

2.3. ANALĐZ VE YÖNTEMLER 

2.3.1. GC-MS Analiz Şartları 

*  Kolon maksimum sıcaklığı 350

0

C,  

*  MS Source sıcaklığı 230

0

C, MS Quadrupol sıcaklığı 150

0

C, 

*  Enjeksiyon hacmi 1µL,  

---

 

54 

*  Split oranı 20:1’dir. Split akış hızı 30mL/dk,  

*  Đnlet sıcaklığı 230

0

C,  

*  Đnlet basıncı 19,6 psi, 

*  Toplam akış hızı 34,3 mL/dk, 

*  Helyum akış hızı 1,5mL/dk,  

*  Genel  Sıcaklık  Programı  50

0

C’den  başlar.  2  dk  bu  sıcaklıkta  kaldıktan           

sonra  dakikada  10

0

C  artarak  290

0

C’ye  çıkar  ve  bu  sıcaklıkta  5  dk 

kalmaktadır. 

*  MDMA Sıcaklık Programı 150

0

C’den başlar, 4dk bu sıcaklıkta kaldıktan 

sonra dakikada 18

0

C artarak 250

0

C’ye çıkar ve bu sıcaklıkta da 3dk kalır.  

 

2.3.2.  GC Analiz Şartları 

•

 

Kolon basıncı 10,53 psi, 

•

 

Kolon akış hızı 1,7 mL/dk, 

•

 

Enjeksiyon hacmi 1µL, 

•

 

Split oranı 20:1, 

•

 

Split akış hızı 30 mL/dk,  

•

 

Đ

nlet sıcaklığı 250

0

C,  

•

 

Toplam akış hızı 38 mL/dk, 

•

 

Dedektör sıcaklığı 300

0

C, 

•

 

H

2

 akış hızı 30 mL/dk, 

•

 

Kuru hava akış hızı 300 mL/dk, 

•

 

Sıcaklık  programı  130

0

C’den  başlar,  2  dk  bu  sıcaklıkta  kaldıktan  sonra 

dakikada 25

0

C artarak 290

0

C’ye çıkar ve bu sıcaklıkta da 3 dk kalır. 

 

2.3.2.1. Sıcaklık Programı Optimizasyonu 

MDMA ve kafein stok çözeltilerinden (1:1 oranında) hazırlanan numune kullanılarak 

yapılan  analizlerde,  MDMA  sıcaklık  programı  ile  MDMA,  kafein  ve  tetrakosan 

---

 

55 

kuyruklanma yapmadan, keskin pikler halinde birbirinden ayrıldı. Ancak bu program 

tam olarak içeriği bilinmeyen tabletler için çok kısadır. Yüksek sıcaklıktan başlayıp 

kolonda  kalma  süresi  kısa  olan  başka  bileşenler  ile  daha  düşük  sıcaklıkta  sona  eren 

bir  program  olduğundan  ağır  bileşenler  için  yeterli  olmadığı  düşünülmüştür.  Bu 

nedenle  daha  düşük  sıcaklıkta  başlayıp  yüksek  sıcaklığa  daha  yavaş  çıkan  genel  bir 

sıcaklık programı oluşturuldu. 

 

2.3.2.2

. Çözücü Optimizasyonu 

Literatürdeki çözücülerden çalışmaya uygun çözücüyü belirlemek için; tabletler aynı 

miktarlarda tartılarak, metanol, toluen, izooktan, kloroform ve n-hekzanda çözeltileri 

hazırlandı.  GC-MS’in  genel  sıcaklık  programı  ile  analizleri  yapıldı.  Ancak 

kloroformla  ve  metanolde  hazırlanan  tabletlerin  yapılan  analizlerinde  çözünmenin 

daha iyi olduğu görüldü.  

 

2.3.3. HPLC Analiz Şartları 

•

 

Kolon Sıcaklığı: Oda sıcaklığı, 

•

 

Akış Hızı 1mL/dk, 

•

 

Enjeksiyon Hacmi 20µ L, 

•

 

Dedektör Sistemi: UV Vis Dedektör, 

•

 

Dedeksiyon Çalışma Dalga Boyu 200nm, 

•

 

Taşıyıcı Faz %10 Asetonitril:%90 Fosfat tamponu çözeltisi, 

•

 

Taşıyıcı Faz pH’ı 4,2, 

 

2.3.3.1. Taşıyıcı Fazın Optimizasyonu 

Birleşmiş  Milletlerin  1987  yılı  “Amfetamin  ve  Metamfetamin  Đçin  Önerilen  Test 

Metodları”  raporunda  kullanılan  taşıyıcı  faz  (%70  Metanol:%30  Su-  bileşimli,  1M 

---